<var id="1tvr5"></var>
<var id="1tvr5"></var>
<var id="1tvr5"><dl id="1tvr5"><progress id="1tvr5"></progress></dl></var>
<menuitem id="1tvr5"></menuitem>
<var id="1tvr5"></var><menuitem id="1tvr5"><dl id="1tvr5"><progress id="1tvr5"></progress></dl></menuitem>
<var id="1tvr5"></var>
<cite id="1tvr5"></cite>
<menuitem id="1tvr5"></menuitem><menuitem id="1tvr5"></menuitem>
您好!歡迎訪問深圳艾維迪泰生物科技有限公司網站!
全國服務咨詢熱線:

18098992689

當前位置:首頁 > 技術文章 > 細胞培養技巧方法

細胞培養技巧方法

發布時間:2022-02-18      點擊次數:111
  細胞復蘇
 
  細胞復蘇和凍存講究“慢凍快溶”,復蘇時一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細胞凍存液快速融化至37℃,使胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。
 
  復蘇準備
 
  ●打開水浴鍋加熱至37℃。
 
  ● 超凈臺上放好離心管(一般15ml的),細胞培養瓶,移液管,紫外滅菌至少20至30分鐘,吹風5至10分鐘除去臭氧。
 
  ● 37℃預熱好要復蘇細胞的培養液,也可以不用預熱培養液,根據細胞情況選擇。
 
  ●向離心管中加約5至10ml培養液,從液氮罐或-80℃中取出凍存細胞,立即將凍存管放入37℃水浴中并輕輕搖動,待融化后(約2min即可)立即將解凍的細胞轉移至含培養液的離心管中,800-1000rpm下離心5min,棄上清,加適量完全培養液輕輕吹打重懸細胞后轉移至細胞培養瓶中,輕晃使瓶底液體分散均勻,標好細胞名稱、代數、復蘇日期,顯微鏡下觀察后放入37℃,5%CO2培養箱中。一般貼壁細胞過夜即可貼壁,換液和傳代時間根據不同細胞生長情況而定。
 
  細胞復蘇注意事項
 
  ?復蘇時動作要快,盡量減少胞內形成冰晶,影響復蘇后細胞活率。
 
  ? 融化時盡量不要碰到管口,以免容易造成污染。
 
  ?若一次性需要復蘇細胞很多,可以分批水浴解凍,防止傳熱不佳使得細胞融化時間延長。
 
  ?若需要同時復蘇好幾種細胞,提前在離心管和培養瓶上做好標記,或記住自己擺放的位置,不要弄混亂。
 
  細胞傳代培養
 
  1. 懸浮細胞傳代
 
  待培養液中酚紅指示劑變黃,在已紫外滅菌后的超凈臺上吸出或倒出細胞懸液至離心管中(根據細胞液的量選擇15ml或50ml離心管),800-1000rpm下離心5min,棄去營養匱乏的舊培養液,加預熱好的完全培養液適量,輕輕吹打重懸細胞后,吸取適量細胞懸液轉移至細胞培養瓶中,或直接取適量細胞懸液至新培養瓶中,再補加一定量新鮮完全培養液進行傳代,有些脆弱的細胞用自然沉降法沉降細胞,吸去上面舊培養液加入新的完全培養液后吹散進行傳代。傳代接種的細胞密度根據不同細胞生長情況而定,一般間隔1-2天即可傳代一次。
 
  2. 貼壁細胞傳代
 
  待培養瓶底中細胞覆蓋率達70%-80%時,在經紫外滅菌后的超凈臺上,棄去舊細胞培養液,用無菌1*PBS洗滌瓶底細胞1-2次,用1ml(T25培養瓶)或2ml(T75培養瓶)trypsin溶液37℃下作用細胞,待顯微鏡下細胞回縮變圓,少部分細胞出現流沙狀時,快速吸去trypsin溶液,加預熱好的新鮮完全培養液終止消化,輕輕吹打使細胞脫落且分散均勻,直接吸取適量細胞懸液轉移至新培養瓶中,或800-1000rpm下離心去上清,加適量新鮮完全培養液吹打重懸細胞,然后轉移適量細胞懸液至新培養瓶中,再加入一定量完全培養液,搖勻瓶底細胞液后進行培養。
 
  細胞傳代培養注意事項
 
  ? 吹打時每次不要排完移液管中液體,同時控制吹打節奏,這樣不容易吹出泡沫,泡沫對細胞有損傷作用,而且很難再顯微鏡下觀察清楚有沒有完全吧細胞吹打下來。
 
  ?不要等到貼壁細胞完全鋪滿瓶底,要留有一定空隙時細胞狀態才良好。
 
  ?消化時最好不要等到細胞成片飄起,否則細胞狀態受影響且第二天培養中死細胞較多。
 
  細胞凍存
 
  凍存的細胞要處在指數生長期。懸浮細胞和貼壁細胞經離心后用凍存液重懸,計數,凍存的細胞密度一般3*106-1*107 cells/ml,最好不少于1*106 cells/ml,否則復蘇后難以養起來,將重懸計數后的細胞懸液以1-1.5ml快速分裝至各凍存管中,迅速擰緊蓋子,放入梯度凍存盒然后置于-80℃過夜,也可以先4℃放置30分鐘,再-20℃放置1-2小時,最后-80℃過夜(16-18小時),若梯度凍存盒不夠或無凍存盒,可以將凍存管置于泡沫盒中,用棉花包起來,棉花厚度約1cm,置于-80℃過夜,第二天取出-80℃細胞存放至液氮罐中,并在記錄好存放位置信息。
 
  凍存準備
 
  ●配制好凍存液。一般凍存液為培養液,血清,DMSO按照7:2:1的比例配制,也可以血清和DMSO按照9:1配制,不管哪種凍存液配制,血清多多益善,但DMSO都不可以多,以免對細胞造成損傷。
 
  ●準備好凍存管,標上細胞名稱,代次,凍存批號,凍存日期。
 
  ●準備好細胞程序降溫盒或凍存用的材料,程序降溫盒放置室溫后使用。
 
  細胞凍存注意事項
 
  ?程序降溫盒有無需有毒異丙醇填充的,有利于實驗人員身體健康。
 
  ?DMSO有毒且皮膚會吸收,做好防護措施。DMSO本身不長菌,不需要做滅菌處理。
 
  ?由-80℃轉至液氮時迅速,避免溫度上升影響細胞活性。
 
  ?每個凍存管不要加入體積太多,以免凍存時凝固體積膨脹,撐開凍存管,且在下次復蘇時,融化較慢,導致復蘇后細胞存活率不高。
深圳艾維迪泰生物科技有限公司
地址:深圳市南山區桃源街道留仙大道1183號南山云谷創新產業園龍塘閣301-303
郵箱:18098992689@ewell.com.cn
傳真:0755-26433092
關注我們
歡迎您關注我們的微信公眾號了解更多信息:
歡迎您關注我們的微信公眾號
了解更多信息
撒尿BBWBBW毛,黑森林精选AV导航,少妇的丰满3中文字幕,护士交换配乱吟粗大交换绿帽
<蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <文本链> <文本链> <文本链> <文本链> <文本链> <文本链>
掃一掃訪問手機站掃一掃訪問手機站
訪問手機站