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讓專業人士告訴你純化磁珠的試驗操作步驟

發布時間:2022-03-07      點擊次數:58
 
  純化磁珠適合于從各種PCR產物或酶促反應液中高通量快速地回收100bp~50kb的DNA/RNA的片段,回收效率高達80%。能有效地去除PCR產物或酶促反應液中的寡聚核甘酸、引物二聚體、鹽、蛋白質等污染。
 
  純化磁珠的操作步驟:
 
  自備試劑:
 
  洗滌液:85%乙醇;
 
  洗脫液:BufferEB(10mMTris-HCl,pH8.0)或去離子水(pH在7.0~8.0之間)。
 
  磁力架:(建議使用深圳艾維迪泰生物科技有限公司針對200μLPCR管磁力架,貨號:BMB32-0.2)
 
  實驗步驟:
 
  1.充分混合震蕩磁珠,使管內磁珠完全均勻懸浮起來。
 
  2.向樣品管(可使用200μLPCR管或96孔板)中加入待純化的DNA樣品溶液。
 
  3.取1.8×樣品體積的磁珠溶液加入樣品管中,漩渦震蕩5秒后,室溫靜止結合5min。
 
  注:放置期間如出現磁珠沉降現象應及時顛倒或者旋窩混勻,以保證磁珠處于懸浮狀態。
 
  4.將樣品管置于磁力架上2min左右或待磁珠被磁力架裝置完全吸附,保持樣品管在磁力架上靜止,用移液槍吸取上清并棄掉,操作過程中避免觸碰到磁珠團。
 
  5.保持樣品管在磁力架上,向管內慢慢加入300μL85%乙醇,保持樣品管不離開磁力架以及磁珠團始終被吸附在管壁上,禁止分散開。
 
  6.將樣品管置于磁力架上2min左右或待磁珠被磁力架完全吸附,保持樣品管在磁力架上靜止,用移液槍吸取上清并棄掉,操作過程中避免觸碰到磁珠團。
 
  7.重復步驟5~6,將管內的液體全部吸除干凈。
 
  8.將樣品管從磁力架上取出,于室溫放置3~5min,使殘留乙醇充分揮發。
 
  注:避免真空干燥,磁珠過于干燥將會降低DNA/RNA洗脫效率。
 
  9.向管內加入20~100μL洗脫液,并用移液槍輕輕吹打5-10次,使磁珠重懸混勻,操作過程中應避免產生氣泡。
 
  10.室溫放置5min以充分洗脫。
 
  注:為了提高洗脫效率,放置期間如出現磁珠沉降現象應及時顛倒或者旋窩混勻,以保證
 
  磁珠處于懸浮狀態。
 
  11.將洗脫樣品管放回磁力架上2min或待所有磁珠都被磁力架裝置完全吸附。
 
  12.小心地將洗脫上清轉移到新的滅過菌的管子中,在轉移過程不要碰到磁珠,如出現磁珠懸起現象請重復步驟11~12。
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